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链特异性转录组测序(strand-specific RNA sequencing)是指在构建测序文库时,利用Illumina高保真Taq酶将mRNA链的方向信息保存到测序文库中。测序后的数据分析可确定转录本是来自正义还是反义DNA链。与普通转录组测序相比,它更能准确地统计转录本的数量和确定基因的结构,同时可以发现更多的反义转录本,目前被广泛地应用于研究基因结构和基因表达调控等领域范围。
应用方向
1) 模式生物基因结构分析:
模式生物已经有完整的基因注释信息,但是实际研究中存在个体差异性。利用链特异性转录组测序可以对个体表达基因的结构进行深度分析,对基因进行重注释。
2) 差异基因准确分析:
能针对不同转录方向的基因进行表达量统计及差异表达分析,从而推断出与功能状态变化相关联的候选基因,揭示差异基因的功能分类和相关代谢通路。
3) 原核生物操纵子分析:
对原核生物的链特异性转录组分析,能更加准确地进行操纵子鉴定和分析。
技术优势:
1) 准确度高:文库制备和测序过程中保留了RNA方向信息,有效数据增多,从而使基因表达定量更加准确。与基因组和参考基因组的比对结果,其链特异的结果均相近或稍高于非特异性结果。
2) 丰富度高:准确发现反义转录本,获取更多转录本相关信息,进行鉴定分析。
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