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总结 | 单细胞研究之10x Genomics 单细胞V(D)J测序
发布日期:2018-05-07浏览:
免疫是人类和脊椎动物最重要的防御机制,在暴露于外来抗原后产生特异性抗体,其特异性和免疫系统多样性的决定因素取决于T/B淋巴细胞的V(D)J重组、重组过程中核苷酸随机插入/缺失以及体细胞超突变,形成多样化的免疫球蛋白库以微调与抗原的相互作用。免疫系统在自身免疫疾病、传染病、癌症等多种疾病中扮演者至关重要的角色,也正因此免疫组库测序一直是多方领域的研究重点,即以T/B淋巴细胞为研究目标,对其产生的多样化免疫分子例如膜型免疫分子BCR和TCR、分泌型免疫分子抗体等进行测序研究。
 
 
技术优势
 
传统免疫组库测序利用的是多重PCR或5’RACE方法,但都存在一定的局限性,如多重PCR法扩增范围局限在CDR3区、5’RACE 法只能获得单链全长信息等。10x Genomics单细胞V(D)J技术的到来打破了传统免疫组库测序的局限,该技术核心是利用微流控芯片制备单细胞体系,并利用5’端接头的通用引物和免疫分子恒定区的巢式引物进行V(D)J富集,具备以下技术优势:
-可实现成对的重链和轻链(B细胞)或α和β链(T细胞)的全长测序
-精细到单细胞水平,并可同时获得大量单细胞的免疫组库数据
-灵活的获取量,可在7分钟内封装100-80000个单细胞,捕获效率高达65%
 
丰富的测序策略
 
从单细胞悬液到准备测序的cDNA文库之间,可以根据不同的研究目的选择测序目标,以下三种文库可自由选择:
-5’端基因表达谱文库
-目标富集T细胞V(D)J文库
-目标富集B细胞V(D)J文库
 
 
研究应用
 
-抗体的鉴定和新抗体的发现
-揭示Ig库的发展,绘制全局Ig库
-研究传染性疾病,如感染发展中的抗体进化谱系等
-研究免疫失调疾病的V(D)J重组倾向性,寻找免疫失调疾病的标记物
-癌症早期检测、癌症进程和复发诊断的标记物以及肿瘤免疫机制的研究
 
样本要求
 
细胞类型:PBMC、T细胞、B细胞、肿瘤细胞
细胞来源:血液提取、磁珠富集、流式分选、组织解离、体外扩增、冷冻保存
细胞状态:单细胞悬液
细胞大小:直径<30μm
保存运输:为了减少运输过程及反复冻融对细胞造成的损伤,晶能提供上门服务!
 
项目经验
 
我们具有丰富的项目经验,稳定成熟的实验技术,处理过各种类型的细胞,除完善的标准分析内容之外,还兼具个性化的高级分析内容,只要您有想法我们愿为您的论文锦上添花!
我们具有丰富的项目经验,稳定成熟的实验技术,处理过各种类型的细胞,除完善的标准分析内容之外,还兼具个性化的高级分析内容,只要您有想法我们愿为您的论文锦上添花!研究背景
 
免疫是人类和脊椎动物最重要的防御机制,在暴露于外来抗原后产生特异性抗体,其特异性和免疫系统多样性的决定因素取决于T/B淋巴细胞的V(D)J重组、重组过程中核苷酸随机插入/缺失以及体细胞超突变,形成多样化的免疫球蛋白库以微调与抗原的相互作用。免疫系统在自身免疫疾病、传染病、癌症等多种疾病中扮演者至关重要的角色,也正因此免疫组库测序一直是多方领域的研究重点,即以T/B淋巴细胞为研究目标,对其产生的多样化免疫分子例如膜型免疫分子BCR和TCR、分泌型免疫分子抗体等进行测序研究。
 
技术优势
 
传统免疫组库测序利用的是多重PCR或5’RACE方法,但都存在一定的局限性,如多重PCR法扩增范围局限在CDR3区、5’RACE 法只能获得单链全长信息等。10x Genomics单细胞V(D)J技术的到来打破了传统免疫组库测序的局限,该技术核心是利用微流控芯片制备单细胞体系,并利用5’端接头的通用引物和免疫分子恒定区的巢式引物进行V(D)J富集,具备以下技术优势:
可实现成对的重链和轻链(B细胞)或α和β链(T细胞)的全长测序
精细到单细胞水平,并可同时获得大量单细胞的免疫组库数据
灵活的获取量,可在7分钟内封装100-80000个单细胞,捕获效率高达65%
 
 
丰富的测序策略
 
从单细胞悬液到准备测序的cDNA文库之间,可以根据不同的研究目的选择测序目标,以下三种文库可自由选择:
5’端基因表达谱文库
目标富集T细胞V(D)J文库
目标富集B细胞V(D)J文库
 
研究应用
 
抗体的鉴定和新抗体的发现
揭示Ig库的发展,绘制全局Ig库
研究传染性疾病,如感染发展中的抗体进化谱系等
研究免疫失调疾病的V(D)J重组倾向性,寻找免疫失调疾病的标记物
癌症早期检测、癌症进程和复发诊断的标记物以及肿瘤免疫机制的研究
 
样本要求
 
细胞类型:PBMC、T细胞、B细胞、肿瘤细胞
细胞来源:血液提取、磁珠富集、流式分选、组织解离、体外扩增、冷冻保存
细胞状态:单细胞悬液
细胞大小:直径<30μm
 
项目经验:
我们具有丰富的项目经验,稳定成熟的实验技术,处理过各种类型的细胞,除完善的标准分析内容之外,还兼具个性化的高级分析内容,只要您有想法我们愿为您的论文锦上添花!
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